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价格:面议 2025-09-04 13:06:01 9次浏览
电泳的分离核心依赖迁移率(Mobility, μ) —— 即带电粒子在单位电场强度下的移动速度,其大小由粒子自身性质和环境因素共同决定:
影响因素 具体作用
粒子自身性质 1. 电荷量:电荷越多,电场力越大,迁移越快(如 DNA 带负电,电荷量随片段长度增加而增多);
2. 分子大小:分子越小,介质阻力越小,迁移越快(如小分子蛋白质比大分子蛋白质迁移快);
3. 分子形状:球形分子比线性 / 不规则分子阻力小,迁移更快(如球状蛋白>纤维状蛋白)。
外部环境因素 1. 电场强度:电压越高,电场力越强,迁移越快(需平衡速度与分辨率,电压过高易导致发热);
2. 缓冲液:提供稳定 pH(维持粒子带电状态)和离子强度(影响电场传导与粒子稳定性);
3. 支持介质:如凝胶、滤纸等,通过孔径大小 “筛选” 不同分子(核心作用,如琼脂糖凝胶的多孔结构)。
典型操作流程(以 SDS-PAGE 为例)
凝胶制备:根据目标蛋白质分子量配置凝胶(小分子用高浓度胶,如 15%;大分子用低浓度胶,如 8%),分为 “分离胶”(下层,起分离作用)和 “浓缩胶”(上层,使样品浓缩成窄带,提高分辨率)。
样品处理:蛋白质样品与 SDS 上样缓冲液(含 SDS、还原剂 β- 巯基乙醇、溴酚蓝指示剂)混合,95℃加热 5-10 分钟,使蛋白质变性并结合 SDS。
上样与电泳:将处理好的样品加入凝胶加样孔,同时加入 “蛋白质分子量标准品”(Marker),接通电源(浓缩胶用低电压,分离胶用高电压),溴酚蓝指示剂迁移至凝胶底部时停止电泳。
检测与分析:
染色:常用考马斯亮蓝染色(简单快速,检测限~0.1μg)或银染(灵敏度高,检测限~1ng);
成像与分析:通过凝胶成像仪拍摄条带,结合 Marker 判断目标蛋白质的分子量,通过条带亮度半定量分析蛋白质含量。
关键应用领域
电泳技术是生命科学和医学的 “基础工具”,核心应用包括:
分子生物学:DNA/RNA 分离、鉴定、纯化(如 PCR 产物验证、基因克隆中的酶切分析)、核酸测序(毛细管电泳为核心技术之一)。
蛋白质研究:蛋白质分子量测定、纯度分析、表达量检测(如 Western Blot 前的样品验证)、蛋白质复合物分离。
医学检验:临床诊断(如血清蛋白电泳检测肝病、肾病,血红蛋白电泳筛查地中海贫血)、病原体检测(如病毒核酸电泳鉴定)。
食品与环境:食品中过敏原(如大豆蛋白、乳蛋白)检测、环境污染物(如重金属离子、农药残留)分析。
后处理(保证涂层性能稳定)
烘干固化:将工件放入高温烘箱,按涂料要求控制温度(阴极电泳 160-180℃,阳极电泳 140-160℃)和时间(20-40 分钟),使涂层交联固化,形成终的机械性能和耐腐蚀性(固化参数直接影响涂层硬度、附着力)。
冷却检验:工件自然冷却后,检测涂层外观(无流挂、针孔、色差)、厚度(用膜厚仪测量)、附着力(划格法测试,需达到 GB/T 9286 标准 0 级或 1 级)、耐腐蚀性(盐雾测试、耐溶剂测试)。
- 公司:深圳市宝安区松岗东兴电泳烤漆厂
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